وفي غزوة أحد، كان مصعب بن عمير إلى جانب النبي -صلى الله عليه وسلم- والصحابة، في صد جحافل قريش التي جمعت للعدوان على المسلمين في المدينة، والثأر من هزيمتها يوم بدر. وحمل مصعب اللواء مجالدا المشركين، وكان من الثلة التي ثبتت وقاتلت عن رسول الله، بعد أن اضطربت صفوف المسلمين إثر نزول الرماة من على جبل أحد.